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    端粒酶ELISA試劑盒種屬多樣完備

    更新時間:2018-10-10點擊次數(shù):639

    端粒酶ELISA試劑盒 種屬多樣完備

    引起 ELISA 測定結(jié)果與文獻報導(dǎo)不一致的原因主要有三點,試劑因素、標本因素和操作因素。試劑因素:●1. 試劑應(yīng)選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好、批間差小、操作方便的試劑。 2.不同廠家的試劑一定不能混用,包括底物和洗滌液。由于校準標準有差異,還有抗體、檢測方法、試劑、交叉反應(yīng)等因素都會導(dǎo)致對樣本的檢測結(jié)果不一致。如:有的廠家酶標板孔間 CV 值大于 20%,標記酶的活性及顯色液的穩(wěn)定性比較差,使用劣質(zhì)的試劑必然導(dǎo)致結(jié)果的假陽性或假陰性。 3. 要注意試劑的批號和出廠日期,雖然試劑的有效期多為 1 年,選擇剛出廠的試劑盒為宜。 4. 避免選擇假的 ELISA 試劑盒。有些廠家為夸大生產(chǎn) ELISA 的指標范圍,用一種指標來冒充其它指標,造成各種種屬、各種指標都可以做的假象。標本因素和操作因素:● 血清是常用的 ELISA 標本,血漿一般可視為與血清同等的標本,標本引起的假陽性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致,分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種。 內(nèi)源性物質(zhì):有人認為大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質(zhì),可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有:類風(fēng)濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠 Ig (s) 抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。外源性物質(zhì):外源性物質(zhì)常常是由于用于 ELISA測定的血標本的采集、貯存等不當(dāng)所致。如標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存過久、標本凝集不全和采血管中添加物等影響。

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    端粒酶ELISA試劑盒試劑盒(多種屬)行業(yè)操作流程如下:(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。 (2)酶標板置4℃,包被過夜。(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF工作液50μl。 (5)酶標板置37℃箱的濕盒內(nèi),孵育60min。 (6)洗板,同(4)。 (7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔工作液 100μl。 (8)酶標板置37℃箱的濕盒內(nèi),孵育60min。 (9)洗板,同(4)。 (10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 (11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 (12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以由容器上的劃痕或指印等造成的光。(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定。

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    編輯:小檀20181010

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