ELISA實驗的質量控制是確保數據可靠性的生命線，貫穿實驗前、中、后全過程。掌握以下要點，能系統性提升實驗成功率并快速定位問題。
一、核心質控要點
標準曲線的性
有效性：相關系數（R²）須>0.99，確保定量準確。
精確性：每點復孔的CV值應<10%，尤其是低濃度點。
范圍匹配：確保待測樣本的OD值落在標準曲線的最佳線性區間內。
板內與板間精密度
板內質控：設置高中低三個濃度的質控樣本，驗證同板操作的重復性。
板間質控：不同批次實驗中使用相同的質控樣本，監控實驗穩定性。
樣本與試劑
樣本處理：嚴格遵循樣本類型（血清、血漿、細胞上清）的處理與保存規范，避免反復凍融。
試劑平衡：所有試劑（特別是酶結合物和底物）使用前需恢復至室溫并混勻，避免“邊緣效應”。
二、常見故障與排除策略
問題：高背景（全板整體發色深）
排查：①洗滌不充分或污染→增加洗滌次數與浸泡時間；②封閉不充分或封閉液失效→優化封閉條件或更換封閉液；③酶結合物濃度過高或孵育過長→嚴格按說明書操作或進行預實驗滴定。
問題：信號弱或無信號
排查：①試劑失效（尤其是酶和底物）或加樣錯誤→檢查試劑有效期，使用新批次驗證；②孵育時間/溫度不足→確保在設定條件下足時孵育；③樣本中目標物含量極低或存在基質干擾→重新評估樣本類型或進行預稀釋。
問題：重復性差（復孔CV值過高）
排查：①加樣操作不規范→確保使用校準過的移液器，并沿孔壁緩慢勻速加樣；②洗板后殘留液體不均→確保洗板后充分拍干（無液滴殘留），但勿使孔壁干燥；③孵育時溫度不均→使用水平搖床并確保酶標板覆蓋加熱模塊。
結論：建立并記錄每次實驗的標準化操作流程（SOP），嚴格監控質控參數。出現問題時，遵循“從試劑到操作，從儀器到環境”的系統性排查邏輯，并優先通過重做標準曲線和質控樣來驗證系統本身是否正常。
更新時間：2026-01-08
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